HPLC常见问题及解决方案

1、压力问题

（1）压力低。（a）低粘度流动相, 解决办法：使用Kozeny-Carmen或类似方程计算预期压力。（b）活塞密封垫泄漏, 解决办法：检查是否存在漏液现象，必要时更换相关部件。（c）系统泄漏, 解决办法：检查是否有漏液，拧紧或更换相关漏液部件。（d）系统中有气泡, 解决办法：确保溶剂瓶或溶剂管线经过完全灌洗，且purging阀完全关闭，脱气机正常工作。(e) 溶剂过滤吸头、单向阀及管线等压力传感器之前的部件堵, 解决办法：用分段排除法检查系统管路是否堵塞。(f) 泵流速故障, 解决办法：用计量过的器皿判断泵流量是否准确，确认故障报修。

(2)压力高。（a）高粘度流动相, 解决办法：使用Kozeny-Carmen或类似方程计算预期压力。(b)泵流速故障, 解决办法：用计量过的器皿判断泵流量是否准确，确认故障报修。(c) 压力传感器之后的管路堵塞、检测器流通池、自动进样器进样针或针座堵塞。解决办法：用分段排除法确定堵塞的位置，冲洗（反冲）或更换相关部件。(d) 保护柱或分析柱堵塞。解决办法：冲洗（反冲）或更换相保护柱或分析柱。

(3) 压力波动。（a）单向阀堵塞造成, 解决办法：超声清洗单向阀。(b) 管路中有气泡, 解决办法：重新purge管路。

2、基线问题

（1）基线波动、基线漂移。（a）系统未平衡, 解决办法：至少10倍柱体积平衡系统。注意室温是否稳定避免空调出风口直吹仪器。(b) 流通池中有气泡, 解决办法:冲洗流通池。(c) 保护柱被污染, 解决办法：更换保护柱。(d) 检测器污染, 解决办法：按照厂商要求清洗流通池。(e) 溶剂被污染, 解决办法：更换溶剂。(f) 检测器灯能量低, 解决办法:更换相关灯。(g) 梯度洗脱, 解决办法：使用纯度更高的溶剂或选择其他波长，如还存此情况属正常现象。(h) 系统泄漏, 解决办法：检查泄漏位置，拧紧或更换泄漏处部件。(i) 温度波动, 解决办法：使用柱温箱，如条件要求苛刻可使用柱前加热模块及柱后冷却模块。控制室温，避免空调出风口直吹仪器。(j) 色谱柱污染, 解决办法：更换保护柱必要时更换分析柱。(k) 泵未适当混合溶剂, 解决办法：在梯度洗脱时如仪器为低压系统确保比例阀正常工作，如仪器时高压系统确保泵流速精准混合器正常工作。(l) 溶剂过滤器堵塞, 解决办法：超声（浸泡）清洗溶剂过滤器，应注意材质是否可以超声。

3、峰形问题

（1）峰展宽。（a）系统未平衡, 解决办法：用至少10倍柱体积平衡系统。(b) 进样溶剂过强, 解决办法：确保进样溶剂强度与流动相强度相当或更弱。(c) 进样体积过高, 解决办法：减少进样体积。(d) 柱外体积过高, 解决办法：减小样品浓度。(e) 温度波动, 解决办法：使用柱温箱。(f) 保护柱污染或失效, 解决办法：更换新的保护柱。(g) 分析柱污染或失效, 解决办法：冲洗色谱柱必要时更换色谱柱。(h) 柱外体积过大样品扩散 , 解决办法：减小柱外体积。

(2) 双峰。（a）色谱柱过旧，色谱柱填料有塌陷，柱校低. 解决办法：更换色谱柱。(b) 色谱柱污染, 解决办法：冲洗色谱柱。

(3) 倒峰。（a）溶剂被污染或进样溶剂紫外吸收比流动相低, 解决办法：更换新配置的溶剂，第二种情况可以忽略。(b) 检测器信号正负极设置反了，此时峰全部为负, 解决办法：更改检测器设置。(c) RI检测器未平衡 , 解决办法：按厂商要求平衡系统。

(4) 平头峰。（a）检测器过载, 解决办法：减小样品浓度。(b) 检测器设置, 解决办法：检查检测器衰减并重新校零。

(5) 峰拖尾。（a）保护柱过旧, 解决办法：更换保护柱。(b) 色谱柱过载, 解决办法：减小进样体积或减小进样浓度。(c) 色谱柱柱校低, 解决办法：更换色谱柱，对于有极性基团容易与流动相产生氢键易拖尾的化合物，可选择双重封端的色谱柱，或在不影响分析结果的情况下，加入扫尾剂，改善峰型。(d) 色谱柱污染, 解决办法：冲洗甚至更换色谱柱。

(6) 峰前沿。（a）溶剂效应, 解决办法：更换进样溶剂确保进样溶剂强度与流动相相当或更弱。(b) 色谱柱过载, 解决办法：减小进样体积或浓度。

(7) 峰面积重现性不好。（a）峰面积减小，样品降解, 解决办法：新配置样品，对温度敏感的生物样品应使用可控温的自动进样器。(b) 峰面积过小，样品浓度过低，解决办法：增大样品浓度。(c) 检测器设置, 解决办法：选择合适的检测波长。(d) 进样量错误 , 解决办法：检查调整进样针高度确保进样量准确，计量泵正常工作。(e) 样品粘度太大 , 解决办法：延长注射器的吸液时间。(f) 检测器灯能量低 ，解决办法：更换灯。

（8）鬼峰。系统中存在污染，解决办法：排查溶剂、流动相、分析柱、保护柱、检测器、自动进样器、管路等，冲洗或更换被污染的试剂或原件。

（9）保留时间漂移。（a）系统未平衡好, 解决办法：延长平衡时间。(b) 系统漏液, 解决办法：检查漏液位置，拧紧或更换接头或管线。(c) 温度波动, 解决办法：使用柱温箱，控制室温，避免空调直吹仪器。(d) 泵流量有误差, 解决办法：联系报修。(e) 比例阀或混合器故障, 解决办法：联系报修。